上海金鹏分析仪器有限公司

3 年

手机商铺

商家活跃:
产品热度:

上海金鹏分析仪器有限公司

入驻年限:3 年

  • 联系人:

    王培培

  • 所在地区:

    上海 宝山区

  • 业务范围:

    实验室仪器 / 设备

  • 经营模式:

    生产厂商

在线沟通

公司新闻/正文

亲和层析和凝胶层析分离的原理和操作方法

人阅读 发布时间:2021-08-30 17:15

那么下面上海金鹏分析仪器有限公司为大家简单介绍一下关于掌握蛋白纯化中亲和层析和凝胶层析分离的一般原理和操作方法。

一、目的要求:

  1. 学习与掌握亲和层析和凝胶层析分离的一般原理和操作方法。
  2. 了解自动化纯化设备基本组成和原理。
  3. 了解亲和吸附层析琼脂糖、凝胶过滤葡聚糖的基本性质。掌握组氨酸标签蛋白的基本性质和纯化原理和操作;掌握缓冲液置换和脱盐的原理和操作。
 

二、实验概述(如下图)



实验步骤:
  1. 样品预处理:即通过超声这种细胞破碎的手段,将在大肠杆菌 E.coli 中表达的重组的带 6 个 His 标签的绿色荧光蛋白释放到相应的缓冲液当中,再通过离心,0.2 微米滤膜过滤等去除细胞碎片和别的污染物;
  2. 组氨酸标签蛋白亲和层析:HisTrapTMHP crude, 1mL 预装层析柱,进行亲和层析,一步就可以达到 90% 左右的纯度
  3. 凝胶过滤层析脱盐去除咪唑:HiTrapTM  Desalting 5mL 预装层析柱进行脱盐,置换缓冲液
  4. 电泳:对纯化过的样品的检测。

三、设备以及试剂准备(试剂均使用化学纯以上):
  1. 仪器:核酸蛋白检测仪 HD 系列、自动部分收集器 BSZ\DBS 系列、恒流泵 HL 系列
  2. 样品:EGFP 原液
  3. 层析柱:HisTrap HP 1ml, 1 根;HiTrap Desalting 5ml,1 根
  4. 层析缓冲液
 
名称 配方 体积
缓冲液 A
亲和结合缓冲液
脱盐平衡和洗脱缓冲液
25mM 磷酸盐缓冲液,150mM NaCl, 20mM 咪唑,pH7.4 250ml
缓冲液 B
亲和洗脱缓冲液
25mM 磷酸盐缓冲液,150mM NaCl, 500mM 咪唑,pH7.4 100ml
去离子水 灭菌脱气或负压脱气 500ml
层析柱保存缓冲液 20% 乙醇  
 
​​​​​​注射器,烧杯,负压脱气瓶等实验室常用容器

四、实验内容
1. 仪器和实验准备:
所有缓冲液需要过 0.2um 膜过滤,负压脱气抽滤瓶脱气,脱气装置如下图所示:



样品预处理:即通过超声这种细胞破碎的手段,将在大肠杆菌 E.coli 中表达的重组的带 6 个 His 标签的绿色荧光蛋白释放到相应的缓冲液当中,再通过离心,0.45 微米滤膜过滤等去除细胞碎片和别的污染物;用注射器吸取大于 2ml 样品
将注射器内的样品从样品环 3 号口推入,注意不要将气泡推入样品环 (如右图)。
以上就是上海金鹏分析仪器有限公司为大家整理总结关于掌握蛋白纯化中亲和层析和凝胶层析分离的一般原理和操作方法。

我们上海金鹏分析仪器有限公司是专业生产超蛋白纯化系统、超微量核酸蛋白测定仪、化学发光成像系统、凝胶成像分析系统、紫外分析仪、核酸蛋白检测仪、紫外检测仪、光化学反应仪、旋涡混合器、恒流泵、自动部分收集器等为核心的十几个产品系列的厂家,欢迎大家前来订购

上一篇

电泳分析常用方法

下一篇

琼脂糖凝胶电泳迁移速率的影响因素

更多资讯

询价列表

暂时没有已询价产品

快捷询价 发送名片
    当你希望让更多商家联系你时,可以勾选后发送询价,平台会将你的询价消息推荐给更多商家。
    yanxuan

    丁香通研选

    yanxuan

    丁香通小程序

    询价知情同意
    您知悉并同意,丁香通平台展示产品并非为平台自身产品,您发起询价或试用申请后,平台将会把您已提供或按要求提供的相关信息同步提供至所咨询的具体产品商家,由商家为您提供具体产品的价格咨询或产品试用注意事项及相关试用产品或完成相应购买,因此您知悉并授权平台将您的信息进行同步共享。您有权拒绝,但您知悉将无法参加询价或试用活动。